SN/T 2237-2008 进出口食品中甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂残留量检测 气相色谱-质谱法
依据 SN/T 2237-2008，采用乙腈提取与 QuEChERS 分散固相萃取净化，经 DB-5MS 弱极性毛细管柱程序升温分离、EI 源选择离子监测（SIM）模式检测，内标法定量测定进出口粮谷、蔬菜、水果中 8 种甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂（嘧菌酯、醚菌酯、啶氧菌酯、吡唑醚菌酯、肟菌酯等）残留量，方法检出限为 0.01 mg/kg，广泛适用于进出口食品农药残留检验检疫。
方法原理与适用范围
Section titled “方法原理与适用范围”SN/T 2237-2008《进出口食品中甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂残留量检测方法 气相色谱-质谱法》规定了进出口食品中 8 种甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂残留量的测定方法。甲氧基丙烯酸酯类（Strobilurin 类）杀菌剂是线粒体呼吸作用抑制剂，作用于细胞色素 bc1 复合物 Qo 位点，在粮谷、果蔬病害防治中应用广泛，其残留监控是进出口食品安全检验的常规项目。
方法核心：样品经乙腈匀浆提取，氯化钠与无水硫酸镁盐析脱水后离心，取乙腈层经 PSA（伯胺-仲胺）与 C18 混合吸附剂分散固相萃取净化，浓缩定容后注入气相色谱-质谱仪。8 种目标物按分子量与沸点顺序在 DB-5MS 柱上分离，各化合物特征离子在 EI 源（70 eV）下生成，SIM 分段采集消除基质干扰，内标法定量。
表 1 适用范围
| 适用对象 | 具体基质 | 说明 |
|---|---|---|
| 粮谷类 | 大米、小麦、玉米等 | 脱壳粉碎后取样，水分高需注意称样量 |
| 蔬菜类 | 叶菜、果菜、根茎类 | 含色素多，净化时加大 PSA 用量 |
| 水果类 | 苹果、柑橘、葡萄等 | 蜡质层厚，提取前充分匀浆 |
| 进出口食品 | 上述基质进出口批次 | 用于通关检验与贸易仲裁 |
表 2 行业通用配置
| 组件 | 规格要求 | 作用 |
|---|---|---|
| 气相色谱-质谱联用仪 | GC-MS，EI 源 70 eV，四极杆质量分析器 | 分离与检测 |
| 色谱柱 | DB-5MS（5% 苯基-95% 二甲基聚硅氧烷），30 m × 0.25 mm × 0.25 μm | 目标物分离 |
| 自动进样器 | 液体自动进样，1.0 μL 定量环 | 提高进样重复性 |
| 载气 | 高纯氦气（≥99.999%），恒流 1.0 mL/min | 载带样品 |
| 前处理耗材 | PSA、C18、无水硫酸镁、氯化钠 | QuEChERS 净化 |
| 数据处理 | 工作站软件，SIM 分段采集程序 | 采集与定量 |
表 3 深度优化方案
| 配置项 | 推荐规格 | 优化收益 |
|---|---|---|
| 主机平台 | 智恒 GC-2020 气相色谱仪 + 四极杆质谱检测器 | 柱温箱程序升温重现性优于 ±0.1 ℃，保障 8 组分保留时间稳定 |
| 进样模式 | 不分流进样，1 min 后开启分流阀 | 低浓度目标物全量进入色谱柱，提高灵敏度 |
| 离子源维护 | 定期清洗离子源，调谐满足 m/z 69、219、502 丰度比 | 维持稳定电离效率，保证特征离子响应 |
| 色谱柱老化 | 新柱 280 ℃ 老化 2 h 后使用 | 降低柱流失，减少基线漂移 |
| 内标添加 | 环氧七氯 1.0 mg/L 进样前加入 | 校正基质效应与进样误差 |
硬件配置说明：甲氧基丙烯酸酯类残留检测对仪器稳定性要求高——8 种目标物保留时间跨度约 15 min，程序升温段任一温控偏差都会引起保留时间漂移，进而影响 SIM 时间窗口的采集完整性。智恒 GC-2020 气相色谱仪采用双核异构温控架构，柱箱升温速率与保持时间由独立控制回路闭环调节，配合高精度电子气路控制（EPC），可将 8 组分保留时间重复性控制在 ±0.05 min 以内，为多残留同时测定提供稳定的色谱平台。
表 4 操作参数
| 参数 | 设定值 |
|---|---|
| 色谱柱 | DB-5MS，30 m × 0.25 mm × 0.25 μm |
| 进样口温度 | 260 ℃ |
| 载气 | 高纯氦气（≥99.999%），恒流 1.0 mL/min |
| 进样方式 | 不分流进样，1 min 后打开分流阀 |
| 进样量 | 1.0 μL |
| 离子源温度 | 230 ℃ |
| 四极杆温度 | 150 ℃ |
| 传输线温度 | 280 ℃ |
| 电离方式 | EI，70 eV |
| 采集模式 | SIM 分段采集 |
表 5 柱箱升温程序
| 阶段 | 升温速率 | 目标温度 | 保持时间 |
|---|---|---|---|
| 初始 | — | 70 ℃ | 2 min |
| 一阶 | 25 ℃/min | 150 ℃ | 0 min |
| 二阶 | 5 ℃/min | 280 ℃ | 5 min |
工程依据：初始温度 70 ℃ 兼顾溶剂（乙腈）沸点与低沸点目标物（醚菌酯）的聚焦；一阶快速升温（25 ℃/min）压缩分析时间；二阶慢速升温（5 ℃/min）保证高沸点组分（嘧菌酯、吡唑醚菌酯，沸点高于 400 ℃）之间的分离度。SIM 采集窗口按各化合物保留时间设定，每个窗口采集 2～3 个特征离子，驻留时间不低于 50 ms/离子，确保峰形平滑与定量精度。全程分析时间约 35 min，满足进出口批次高通量检验需求。
样品采集与处理
Section titled “样品采集与处理”样品容器：使用具塞玻璃瓶或聚四氟乙烯（PTFE）内衬盖容器采集与盛装样品，避免塑料容器中增塑剂等干扰物溶出；采样工具洁净干燥，防止交叉污染。
表 6 前处理步骤
| 步骤 | 操作内容 | 关键控制点 |
|---|---|---|
| 1 | 样品粉碎匀浆：粮谷脱壳粉碎过 20 目筛，果蔬切碎匀浆 | 称样量 10.0 g（精确至 0.01 g） |
| 2 | 乙腈提取：加入 20 mL 乙腈匀浆提取 1 min | 乙腈为通用提取溶剂，兼顾极性与非极性目标物 |
| 3 | 盐析脱水：加入 4 g 无水硫酸镁与 1 g 氯化钠，振摇 1 min，离心 5 min（4000 r/min） | 盐析分层，水相与有机相分离 |
| 4 | 分散固相萃取：取 6 mL 乙腈层加入 PSA 与 C18 各 50 mg，振摇 30 s 后离心 | 吸附色素、有机酸与脂类共提物 |
| 5 | 浓缩定容：取净化液 4 mL，40 ℃ 氮吹至近干，正己烷-丙酮（9:1）定容至 1.0 mL，加入内标后进样 | 浓缩温度不超过 40 ℃，防止热降解 |
样品保存与运输：新鲜样品采集后 4 ℃ 冷藏，24 h 内完成提取；长期保存置于 -18 ℃ 冷冻，解冻后立即处理，避免反复冻融导致目标物降解。进样前用 0.22 μm 有机滤膜过滤，防止不溶物堵塞进样口衬管。
定量方法：内标法定量。以环氧七氯为内标，进样前按固定浓度加入样品溶液与标准溶液，以目标物与内标峰面积比（或峰高比）对浓度比绘制标准曲线。
表 7 标准曲线配制（内标 1.0 mg/L）
| 浓度点 | 目标物浓度（mg/L） | 用途 |
|---|---|---|
| 点 1 | 0.01 | 接近检出限 |
| 点 2 | 0.05 | 低浓度段 |
| 点 3 | 0.10 | 线性中段 |
| 点 4 | 0.50 | 线性中段 |
| 点 5 | 1.00 | 高浓度段 |
| 点 6 | 2.00 | 上端验证 |
标准曲线至少 5 个浓度点（推荐 6 点），线性相关系数 r 不低于 0.995。样品浓度超出线性范围上限时，用空白基质提取液稀释后重新测定，稀释倍数计入最终结果。定量计算按内标法公式进行，结果以 mg/kg 表示。
表 8 检出限与定量限
| 项目 | 数值 |
|---|---|
| 方法检出限（MDL） | 0.01 mg/kg |
| 方法定量限（MQL） | 0.03 mg/kg |
| 线性范围 | 0.01～2.00 mg/L |
| 相关系数 | r ≥ 0.995 |
表 9 质控措施
| 质控项目 | 要求 | 判定标准 |
|---|---|---|
| 试剂空白 | 每批样品随行测定 | 目标物响应低于检出限 |
| 加标回收率 | 每批至少 1 个基质加标样品 | 回收率 70%～120% |
| 平行样 | 随机抽取 10% 样品双份测定 | 相对偏差 ≤ 20% |
| 内标响应监控 | 每针记录内标峰面积 | 相对标准偏差 ≤ 15% |
| 保留时间窗 | 标准品每批校准 | 漂移 ≤ ±0.1 min |
| 色谱柱性能核查 | 定期注入混合标准 | 分离度 ≥ 1.5，峰形对称 |
质控样与标准曲线同批测定，确保仪器状态稳定；出现内标响应异常或保留时间漂移时，检查进样口衬管污染与色谱柱柱头状态，维护后重新校准。
表 10 出峰顺序与特征离子
| 序号 | 化合物 | 保留时间（min） | 定量离子（m/z） | 辅助离子（m/z） |
|---|---|---|---|---|
| 1 | 醚菌酯 | 11.2 | 299 | 268、207 |
| 2 | 啶氧菌酯 | 12.8 | 335 | 303、145 |
| 3 | 肟菌酯 | 14.5 | 222 | 190、116 |
| 4 | 醚菌胺 | 15.9 | 205 | 195、116 |
| 5 | 苯氧菌胺 | 17.6 | 191 | 196、238 |
| 6 | 环氧七氯（内标） | 18.9 | 353 | 355、81 |
| 7 | 吡唑醚菌酯 | 21.3 | 372 | 325、194 |
| 8 | 氟嘧菌酯 | 24.1 | 392 | 364、238 |
| 9 | 嘧菌酯 | 27.4 | 403 | 344、388 |
关键分离对：醚菌酯（11.2 min）与啶氧菌酯（12.8 min）保留时间间隔 1.6 min，分离度大于 2.0；吡唑醚菌酯（21.3 min）与氟嘧菌酯（24.1 min）间隔 2.8 min，无重叠风险。保留时间最接近的分离对为苯氧菌胺（17.6 min）与环氧七氯（18.9 min），间隔 1.3 min，配合 SIM 分段窗口（两化合物位于不同采集段）仍可实现无串扰定量。各色谱峰半峰宽约 0.08～0.12 min，峰形对称因子 0.9～1.1，无前沿与拖尾，表明 DB-5MS 柱对甲氧基丙烯酸酯类化合物惰性良好。
- 进出口食品检验检疫：口岸实验室对粮谷、蔬菜、水果批次的甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂残留筛查与确证，为通关放行提供数据支撑。
- 食品安全国际贸易检验：出口果蔬生产企业依据进口国限量要求开展出厂自检，保障产品符合贸易伙伴残留标准。
- 农产品质量安全监控：农业农村部门对生产基地、批发市场的果蔬样品例行监测，掌握 Strobilurin 类药剂使用情况。
- 出入境检验检疫技术仲裁：贸易双方对残留结果存在争议时，以 GC-MS 特征离子确证结果作为仲裁依据。
- 食品加工原料验收：果汁、罐头等加工企业对其果蔬原料供应商实施残留验收，从源头控制成品风险。
问：甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂共有 8 种目标物，为何采用分段 SIM 而非全扫描采集？
答：全扫描模式灵敏度不足，低浓度残留（0.01 mg/kg 级）目标离子信号被基质噪声淹没；分段 SIM 在每个保留时间窗口仅采集 2～3 个特征离子，驻留时间延长使信噪比显著提升，同时保留确证所需的离子丰度比信息，兼顾灵敏度与定性可靠性。
问：样品中色素含量高（如深色叶菜）时如何处理？
答：QuEChERS 净化中 PSA 对色素、有机酸吸附能力强，可适当将 PSA 用量从 50 mg 提高至 75～100 mg；若净化后溶液仍有颜色，可增加一次 C18 净化或采用石墨化碳黑（GCB）辅助去除叶绿素，但需注意 GCB 对平面结构目标物可能存在吸附损失，使用前应做回收率验证。
问：内标物为何选择环氧七氯？
答：环氧七氯化学性质稳定、在 DB-5MS 柱上保留时间位于目标物流出区间中部（18.9 min），且其分子离子 m/z 353 与 8 种目标物的定量离子无质量数重叠，不会产生离子串扰；作为有机氯类化合物，其在 QuEChERS 流程中回收率稳定，可可靠地承担基质效应校正职能。
问：仪器长时间运行后峰形变差如何排查？
答：优先检查进样口衬管——甲氧基丙烯酸酯类化合物沸点高，残留在衬管中的非挥发性基质会吸附目标物导致峰拖尾，建议每 100 针更换衬管；其次检查色谱柱柱头切割（截去 5～10 cm）与离子源污染状态，柱流失升高时老化色谱柱或更换新柱，维护后重新调谐并校准保留时间。